犬瘟CSF酶联免疫分析试剂盒操作步骤

   2023-12-16 互联网1580
核心提示:使用目的:犬瘟CSF酶联免疫分析试剂盒用于测定犬血清、血浆及相关液体样本中瘟(CSF)含量。实验原理犬瘟CSF酶联免疫分析试剂盒

 

使用目的:犬瘟CSF酶联免疫分析试剂盒用于测定犬血清、血浆及相关液体样本中瘟(CSF)含量。实验原理犬瘟CSF酶联免疫分析试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中犬瘟(CSF)水平。用纯化的犬瘟(CSF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入瘟(CSF),再与HRP标记的瘟(CSF)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘟(CSF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中犬瘟(CSF)浓度。试剂盒组成

1 20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 3ml×1瓶
2 酶标试剂 3ml×1瓶 8 标准品(120ng/L) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×4条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 3ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2张 
6 显色剂B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1个

标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

60ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
30ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
15ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
7.5ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
3.75ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

  2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4.         配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.         温育:操作同3。8.         洗涤:操作同5。9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 
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