琼脂糖凝胶电泳操作步骤

   2023-08-21 互联网2580
核心提示:琼脂糖凝胶电泳比较法:若DNA样品中含RNA或其它杂质,凝胶电泳是一种方便而较准确的定量方法。 1. 取2lDNA样品,加0.4l电泳上样

琼脂糖凝胶电泳比较法:
若DNA样品中含RNA或其它杂质,凝胶电泳是一种方便而较准确的定量方法。
1. 取2μlDNA样品,加0.4μl电泳上样缓冲液(含溴酚蓝),混匀后加样于含0.5μg/ml溴乙锭的琼脂糖微型电泳凝胶的孔格内。
2. 取一系列浓度不同的2μl标准DNA样品(0.5~50μg/ml)0.4μl上样缓冲液混合上样。标准DNA溶液中,应含有一种与样品DNA分子量大小相近似的DNA分子。
3. 电泳:使DNA移入琼脂糖胶内。一般为溴酚蓝迁移2cm左右。
4. 将凝胶浸入含0.01mol/L MgCl2的电泳缓冲液中5分钟,进行背景脱色。
5. 在短波紫外线(254nm)下进行拍照,比较样品DNA与DNA的标准品的荧光强度,并计算出待测样品中DNA浓度。
荧光法灵敏快速。但它的荧光强度决定于溴乙锭嵌入碱基中的多少,这与DNA的超螺旋程度密切相关,标准与样品难以完全一致,并且还受其它影响荧光发光污染物的影响。
注:本文琼脂糖凝胶电泳法核酸定量分析属于分子生物技术文章,主要介绍核酸、定量分析方面的知识,内容仅供学习交流与参考。

 
举报收藏 0打赏 0评论 0
 
更多>同类资讯
推荐图文
推荐资讯
点击排行
网站首页  |  关于我们  |  联系方式  |  使用协议  |  版权隐私  |  隐私政策  |  网站地图  |  排名推广  |  广告服务  |  积分换礼  |  RSS订阅