感受态细胞转化效率

   2024-01-18 互联网1250
核心提示:为确定感受态细胞的转化效率,可将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中,取一部分转化的细菌,涂布到选择培养基上,可用菌落生长

为确定感受态细胞的转化效率,可将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中,取一部分转化的细菌,涂布到选择培养基上,可用菌落生长单位/μg DNA,按下面的方法计算感受态细胞的转化效率.计算公式:转化效率=产生菌落的总数/铺板DNA的总量。

例如,取1μl(0.1 ng/μl)完整的质粒转化100μl的感受态细胞. 向转化反应液中加入900μl培养液,让细菌恢复一小段时间,取100μl铺板.培养过夜,产生1000个菌落。转化0.1 ng DNA,用SOC稀释到1000μl后,取1/10涂平板,则涂平板共用0.01 ng DNA 质粒,所以转化率=1000克隆/0.01 ng DNA =105 cfu/ng=108 cfu/μg。

转化效率1×10 6 cfu/μg DNA可满足普通的亚克隆实验;1×10 7 cfu/μg DNA用于作更复杂的亚克隆,有限量的DNA的转化,T-克隆实验;构建文库和突变要求用的转化的效率为>1×10 8 cfu/μg DNA。
 

 
举报收藏 0打赏 0评论 0
 
更多>同类资讯
推荐图文
推荐资讯
点击排行
网站首页  |  关于我们  |  联系方式  |  使用协议  |  版权隐私  |  隐私政策  |  网站地图  |  排名推广  |  广告服务  |  积分换礼  |  RSS订阅